Заболевания вирусной этиологии широко распространены среди людей, животных и растений. При постанов¬ке диагноза вирусного заболевания используют микроскопические, биологические и серологические методы исследования.
Микроскопический метод, или вирусоскопия, позволяет обнаружить вирусы, размер которых более 150 нм, а также внутриклеточные включения вируса в пораженных клетках в световом микроскопе при специальных методах окраски. В люминесцентном микроскопе можно выявить специфический вирусный антиген в препаратах, приготовленных из исследуемого материала, с помощью метода флюоресцирующих антител.
Биологический метод включает:
1) выделение вирусов из исследуемого материала в культурах клеток, развивающихся куриных эмбрионах и на чувствительных лабораторных животных;
2) индикацию (определение) вируса в зараженном материале и
3) его идентификацию, или типирование, с помощью серологических методов.
Индикацию вируса в зараженном материале проводят с помощью определенных показателей в зависимости от способа выделения вируса. Показателями наличия вируса служат:
1) специфическая дегенерация клеток при заражении культуры клеток — цитопатический эффект;
2) обнаружение внутриклеточных включений в зараженных клетках;
3) определение специфического антигена вируса методом иммунофлюоресценции;
4) положительный результат реакции гемагглютинации и гемадсорбциии для вирусов, обладающих способностью склеивать эритроциты (гемагглютинирующая активность);
5) появление очаговых морфологических изменений на хорион аллантоисных оболочках куриного эмбриона;
6) гибель или наличие выраженной заболевания при заражении чувствительного животного.
Идентификацию, или типирование, вируса в зараженном материале осуществляют с помощью серологических методов: РТГА и реакции задержки гемадсорбции для вирусов, обладающих гемагглютинирующей активностью, РСК и реакции нейтрализации. При использовании РТГА гемагглютинирующая способность вирусов подавляется специфическими иммунными сыворотками, а при определении типа вируса — типоспецифическими сыворотками. Вследствие этого вирусы теряют способность агглютинировать эритроциты. При реакции задержки гемадсорбции специфическая иммунная сыворотка, добавленная к пораженной вирусом культуре клеток, предотвращает адсорбцию эритроцитов на поверхности клеток. Сущность реакции нейтрализации основана также на способности специфических иммунных сывороток гасить инфекционное действие вируса, что определяют при дальнейшем введении исследуемого материала чувствительным животным или в культуру клеток. Если специфическая сыворотка нейтрализовала вирус, то животные не гибнут, а в культуре клеток не наблюдается цитопатический эффект.
Серологический метод диагностики вирусных заболеваний относится к методам поздней, ретроспективной диагностики и дает положительный результат только при исследовании парных сывороток больного, взятых в начале заболевания и через 2—3 нед. Диагноз считается подтвержденным лишь при увеличении количества антител во второй сыворотке в 4 раза и более. Для определения антител в крови больного используют РСКТ РТГА. РПГА, реакцию торможения (задержки) пассивной гемагглютинации (РЗГА) и реакцию нейтрализации. Специфические антигены для последней реакции готовят путем заражения куриных эмбрионов или культуры клеток, которые подвергают затем специальной обработке.
