Исследование клетки в окрашенном виде

Законы проницаемости клетки для различных красящих веществ те же, что и для питательных веществ. Таким образом, на основании только что сказанного a priori можно сказать, что живая клетка должна иначе пропускать и окрашиваться определенными красками, нежели мертвая клетка.

а) Прижизненная окраска. Гёбер резко разделяет прижизненную окраску основными и кислыми красками.

Основные краски — в гематологической технике применяются главным образом нейтральрот и янусгрюн — как растворимые в липоидных смесях легко проникают в клетку, окрашивая здесь преформированные структуры, главным образом адсорбируясь на их поверхности. Отметим, что понятие «адсорбция», по определению Михаэлиса (Michaelis), заключает в себе явление накопления какого-либо вещества на границе двух фаз в концентрации, превышающей таковую в этих обеих фазах.

Остановимся вкратце на тех данных, которые мы получаем при прижизненной окраске основным красящим веществом, например, нейтральротом. Как и многие другие органические красящие вещества, нейтральрот является индикатором; он меняет свою окраску в зависимости от реакции среды, в которой находится. Изменение окраски нейтральротом вплоть до полного обесцвечивания является, таким образом, очень тонким реактивом для выявления изменчивости протоплазмы. Проникая в протоплазму клетки, нейтральрот концентрируется, адсорбируясь на поверхности особых образований, которые Симпсон (Simpson) называет Segre- gationsgranula, как бы на выделительном «органе» клетки. Нанося свежую каплю крови по Сэбин (Sabin) на покровное стекло, покрытое тонким слоем высохшей смеси нейтральрота и янусгрюна, мы получаем через 15—20 минут элективную окраску белых кровяных телец: янусгрюн окрашивает митохондрии, гранулы нейтральрота выступают в виде оранжевокрасных круглых образований. В самых юных эритроцитах, а также в ядросодержащих красных кровяных тельцах мы получили этим способом окраски гранулы нейтральрота и митохондрии, окрашенные янусгрюном в зеленый цвет. Наблюдая окрашенные таким способом молодые эритроциты, мы установили, что через некоторое время (проходит приблизительно около часа) как гранулы нейтральрота, так и митохондрии начинают двигаться (броуновское движение), а затем совершенно исчезают. Момент исчезновения окраски эритроцитарной структуры, нужно думать, совпадает со смертью клетки. Сделав такое предположение, мы стали искать аналогичные наблюдения в литературе. Оказалось, что в 1904 г. Ружичка (Ruzicka) опубликовал метод, основанный на том, что протоплазма парамеций при жизни окрашивается нейтральротом, тогда как со смертью парамеций красное окрашивание нейтральротом их протоплазмы исчезает. Ружичка объясняет это явление наступлением «Protoplasmahysterese» — изменением электрической диссоциации белков протоплазмы; при отмирании выравнивается концентрация анионов и катионов, в результате чего коллоид теряет свой электрический заряд. С разряжением коллоидной системы исчезают адсорбтивные свойства его поверхности и нейтральрот снова переходит в раствор, становясь невидимым.

Таким образом, способ прижизненной окраски является не только методом выявления клеточных структур, но он является также как бы индикатором процессов, протекающих в клетке. Появление броуновского движения косвенно указывает на прекращение токов в клетке, на прекращение динамических проявлений жизни клеток, на ее отмирание.

б) Прижизненная окраска кислыми красящими веществами. Как уже было указано, способ проникновения в клетку кислых красящих веществ, не растворимых в липоидах, совершенно иной, нежели основных, — эти вещества попадают в клетку только благодаря физиологической изменчивости оболочки, в зависимости от процессов, протекающих внутри клетки, благодаря ее фагоцитарной способности. Поэтому, чем большей фагоцитарной способностью обладает данный вид клетки, тем легче он окрашивается кислыми красками (например, трипанблау, пиролблау и т. д.). По теории Гёбера, кислые краски проникают через протоплазматические сегменты клеточной оболочки, регулирующие приток питательных веществ к клетке. Законы, которым подчинена эта регуляция, еще мало изучены, но как пример можно привести данные из работы Монда (Mond), который устанавливает на красных кровяных тельцах изменчивость проницаемости их для ионов под влиянием изменения среды: в обычных условиях (в плазме крови) оболочка эритроцитов является проходимой только для анионов, в щелочной среде она становится проходимой для катионов. Отчасти это явление объясняется тем, что электролиты проникают в клетку путем изменчивости коллоидов на поверхности клетки, отчасти же тем, что в оболочке клетки предполагается наличие пор, величина которых при обычных условиях существования эритроцитов допускает лишь прохождение анионов, тогда как под влиянием изменившегося заряда поверхности пор они могут стать проходимыми и для катионов. Таким образом, внешняя среда изменяет внутренний состав клетки, который в свою очередь изменяет взаимоотношения между клеткой и внешней средой, иными словами: клетка регулирует свой обмен веществ соответственно составу внешней среды.

Прижизненной окраской кислыми красящими веществами пользуются главным образом путем впрыскивания их животным.

в) Предсмертная окраска. В течение процесса отмирания, во время агонии, клетка претерпевает различные изменения, характеризующиеся главным образом уменьшением ее потенциальной энергии, изменением проницаемости клетки для различных веществ, связанных, быть может, не только с изменением заряда оболочки, но и с изменением ее структуры. Как на пример изменения протоплазматической структуры при отмирании клетки можно указать на превращение митохондральных нитей в сетку, расплывающуюся по всей протоплазме. Эти предсмертные структуры мы имеем возможность выявлять, например, в красных кровяных тельцах в виде так называемой сетчатой структуры молодых эритроцитов. Наиболее употребительной в гематологии является окраска брилланткрезильблау.

г) Посмертная окраска фиксированных клеток и тканей. Она имеет наибольшее применение. От быстроты фиксации и от качества фиксирующей жидкости (или паров) всецело зависит последующая окрашиваемость препарата. Таким образом, при посмертной окраске мы должны считаться не только с изменением свойств материи при переходе от жизни к смерти, но также с теми изменениями, которые она претерпевает под влиянием фиксирующей среды (включая сюда, конечно, и фиксацию высокой температурой).

Остановимся на процессах, имеющих место при окраске фиксированной клетки, лишь в общих чертах, так как мы еще далеки от того, чтобы иметь возможность при каждой специальной окраске установить точный механизм происходящего внутри клетки процесса. Краска может восприниматься субстанцией — химическим соединением, путем осаждения краски и, наконец, ее адсорбцией. Несомненно при окрашивании клеток все эти три способа могут иметь место, но нужно думать, что физико-химические реакции являются наиболее частыми, что можно заключить хотя бы из того, что большинство способов окраски крайне чувствительно к самым незначительным изменениям; например, от небольшого колебания концентрации водородных ионов может совершенно измениться окраска препарата (краски, как говорят, очень «капризны»), что отнюдь не свойственно химическим процессам. Поэтому в настоящее время нельзя руководствоваться теорией Эрлиха (как бы заманчива она ни была), что с помощью красок можно произвести химический анализ клетки в том смысле, что основные вещества ее окрасятся кислыми красками и, наоборот, кислые — щелочными. На основании этой теории Эрлих, как известно, подразделил лейкоциты по признаку их зернистости на эозинофилы, базофилы и нейтрофилы. Ученик Эрлиха Михаэлис доказал ошибочность этой теории на лейкоцитах, другие же исследователи — на различных клеточных элементах. Независимо от того, что при окрашивании препарата мы должны считаться с различными физико-химическими особенностями этого процесса, необходимо еще учитывать, что большинство органических красок находится в коллоидальном или полуколлоидальном [Зигмонди (Zsigmondy)] состоянии; коллоидальные краски окрашивают в зависимости от электролитов окружающей среды в одном случае кислые вещества, в другом — щелочные. Поэтому в настоящее время мы часто должны довольствоваться стандартом типа окраски клеток волокон и межуточного вещества в норме, устанавливая и оценивая известные отклонения от нее как патологию.


Практические занятия медицинские биологические препараты для профилактики и лечения инфекционных заболеваний

Занятие 1-е. Вакцины и анатоксины.

Вопросы для обсуждения. 1. Искусственный иммунитет, активный и пассивный. 2. Препараты для создания искусственного активного иммунитета: вакцины и анатоксины. 3. Виды вакцин: живые, убитые и химические. 4. Способы приготовления вакцин. 5. Анатоксины нативные и очищенные, их получение и титрован...


Практические занятия вирусы

Занятие 1-е. Методы вирусологических исследований.

Вопросы для обсуждения: 1. Особенности биологии вирусов. 2. Принципы классификации вирусов. 3. Вирион, его строение, размеры и химический состав. 4. Микроскопические методы изучения морфологии вирусов. 5. Методы культивирования вирусов на культурах клеток, куриных эмбрионах, лаб...


Препараты для профилактики и лечения вирусных заболеваний

Препараты для профилактики и лечения оспы. Оспенная вакцина сухая — Vaccinum variolae siccum является живой вакциной. В зависимости от субстрата, на котором культивируют вирус, различают дермальную (культивирование на коже животных), тканевую (культивирование в клеточных культурах) и яичную или ововакцину (культивирование на куриных эмбрионах).

Возбудители основных вирусных заболеваний

Возбудитель оспы. Возбудитель оспы является одним из самых крупных вирусов (200—350 нм). Этот вирус может быть обнаружен в оптическом микроскопе при применении специальных методов окраски (тельца Пашена).

При натуральной оспе в эпителиальных клетках обнаруживаются внутриклеточные включения — тельца Гуарниери.



Категория: Общие вопросы гематологии
Просмотров: 15 | Теги: микроскопия окрашенной клетки, исследование клетки, микроскопия клетки, окрашивание клетки