Почва является основным резервуаром микроорганизмов в природе. Качественный состав микрофлоры почвы исключительно разнообразен. Микробиологическое исследование почвы имеет важное значение.
Оно проводится:
1) при строительстве жилых объектов, прежде всего детских учреждений (детские сады, пионерские лагеря и др.);
2) при решении вопросов о водоснабжении и канализации населенных мест;
3) для контроля за работой сооружений по очистке населенных мест;
4) для санитарной оценки методов обезвреживания нечистот и твердых отбросов;
5) при эпидемиологических обследованиях для выяснения путей заражения и сроков выживания патогенных микробов в окружающей среде, в том числе и в почве;
6) для санитарной оценки почв, загрязненных различными химическими веществами.
В зависимости от поставленной задачи проводят краткий или полный санитарно-микробиологический анализ почвы (Инструкция по санитарно-бактериологическому исследованию почвы, 1958; «Методические указания по санитарно-микробиологическому исследованию почвы», № 1446, 1976). Краткий санитарно-микробиологический анализ почвы включает определение:
1) общего количества бактерий, растущих на мясо-пептоном агаре;
2) санитарно-показательных микроорганизмов — БГКП;
3) термофильных бактерий.
Отбор и предварительная обработка проб почвы. Для изучения микробного загрязнения на каждые 1000 м2 территории выделяют два участка по 25 м2 каждый. Один из них должен находиться на чистой территории, другой — на предполагаемом участке загрязнения. Отбирают средний образец почвы, состоящий из отдельных проб, взятых в 3—5 точках по диагонали, или в 5 точках, взятых под углом и в центре участка. Отдельную пробу берут из поверхностного слоя почвы глубиной до 20—25 см, снимая верхний слой. После чего лопатку прожигают, берут кусок почвы и от него в стерильную посуду отделяют пробу почвы массой 200—300 г. Из отдельных хорошо перемешанных проб почвы составляют средний образец, масса которого должна быть не менее 1 кг. От среднего образца отделяют 200—300 г и вносят в стерильную посуду. Затем почву дробят в стерильной ступе, просеивают через стерильное сито, отбирают навеску для исследования от 1 до 30 г, в зависимости от предполагаемой степени загрязненности почвы.
Определение общего количества бактерий. Этот показатель имеет условное санитарно-гигиеническое значение. Делают разведения почвенной навески от 1:10 до 1 : 10 000— 1 : 100 000. Из каждого разведения производят посев 1 мл в стерильную чашку,» в которую вносят расплавленный и остуженный до 45°С агар, а затем перемешивают. После застывания агара посевы помещают в термостат на 48 ч при 28—30°С. Для подсчета выросших колоний берут те разведения, при которых на чашке выросло от 50 до 150 колоний. После подсчета колоний делают пересчет на 1 г почвы.
Определение БГКП. Для определения фекального загрязнения почвы используют два метода:
1) титрационный;
2) метод мембранных фильтров.
Определение БГКП в почве титрационным методом. Из первого разведения почвенной суспензии (1:10) 10 мл засевают в 50 мл среды Кесслера, что соответствует посеву 1 г почвы. Из следующих разведений засевают по 1 мл в 9 мл той же среды. Посевы выращивают 48 ч при 43°С. Отсутствие газообразования и помутнения в бродильных сосудах со средой через 48 ч позволяет дать отрицательный ответ. При наличии в средах газообразования и помутнения или только помутнения производят высев на чашку со средой Эндо. Чашки инкубируют 24 ч при 37°С. Типичными для кишечных палочек являются колонии красного или розового цвета. Дальнейшую идентификацию колоний проводят аналогично исследованию воды на наличие кишечных палочек.
Ускоренное определение кишечных палочек методом мембранных фильтров. Этот метод применяют при исследовании малозагрязненных почв. Через мембранные фильтры № 3 пропускают 5—10 мл почвенной суспензии из разведения 1:10. Дальнейший ход аналогичен определению этим методом кишечных палочек в воде. Результат бактериологического исследования выражают коли-индексом или коли-титром. Под коли-индексом подразумевают количество кишечных палочек в 1 г почвы, под коли-титром — наименьший объем почвы, в котором еще обнаруживают кишечную палочку.
Определение термофильных бактерий. Термофильные бактерии попадают в почву вместе с созревшими органическими удобрениями (навоз, компост). Сточные жидкости, испражнения, свежий навоз богат кишечной палочкой, но бедны термофилами. Поэтому почвы, содержащие много кишечных палочек и мало термофилов, могут рассматриваться как загрязненные фекалиями. Учет термофильных бактерий производят на агаре, который разливают толстым слоем. Посевы делают из разведений почвы 1 : 10— 1 : 100 000 в количестве 1 мл на две чашки с агаром. Выращивают 24 ч при 60°С. Пересчет термофильных микробов на 1 г почвы производят аналогично расчету при изучении общей обсемененности.
Помимо описанных показателей в почве, можно определить также титр CI. perfringens, хотя значение этого показателя в целях определения санитарного состояния почвы невелико в связи с тем, что CI. perfringens может не только долго сохраняться, но и размножаться в почве. Однако наличие этого микроба косвенно может указывать на присутствие других клостридий, например возбудителей столбняка — CI. tetani и ботулизма — Gl. botulinum.
Микробиологические исследования проводят в комплексе с химическими, определяя содержание нитрифицирующих бактерий, аммонифицирующих, аэробных целлюлозоразлагающих микроорганизмов, а также присутствие аммиака и нитритов.
В случае необходимости, по эпидемиологическим показаниям, определяют наличие в почве патогенных энтеробактерий, возбудителей пищевых токсикоинфекций, проводят санитарно-вирусологические исследования.
