Приготовление азур-эозина и окраска препаратов по Эрлиху

Приготовление краски — основной раствор. 0,5 Na2CO2 растворяют в 100 см3 дистиллированной воды, предварительно прокипяченной и остывшей; туда же прибавляют 1,0 метиленовой синьки (метиленблау для окраски бактерий) и по растворении ставят в термостат при 37° на 2 суток, часто взбалтывая. Затем краску вынимают из термостата и оставляют в темном месте при комнатной температуре на 3 — 5 дней. В растворе образовался азур. Для окрашивания употребляют раствор метиленовой синьки, азура 1: 1000 (1 часть основного раствора + 9 частей дистиллированной воды) и 1:1000 водного раствора эозина (W. g.). 

Красят следующим образом: раствор синьки 1: 1000 и эозина 1: 1000 помещают в склянки капельницы «Patent». Вместо капельниц можно пользоваться градуированными пипетками с делениями 1/100, отдельными для синьки и эозина. Приготовляют 3 см3 смеси краски и дистиллированной воды, каковое количество достаточно для окраски одного препарата крови.

Смеси следующие: раньше наливают 6 капель (0,4 см3) синьки, доливают почти до 3 см3 дистиллированной воды, оставляя место для 6 капель (0,4 см3) эозина 1: 1 000, смешивают и наливают на фиксированный препарат, красят 15 — 20 минут, краску смывают водой.

1. Смесь синька-азур и эозин по 6 капель в 3 см3 дает нейтральный тип окраски (тип Гимза). Красить 15 — 20 минут.

2. Смесь синька-азур 6 капель (0,4 см3) и эозина 2 — 3 капли (0,13 —  0,2 см3) в 3 см3 дает щелочной тип окраски (тип Ройтера).

3. Смесь синька-азур 12 капель (0,8 см3) и эозина 2 — 3 капли (0,13 — 0,2 см3) в 3 см3 дает резко щелочной тип окраски (тип Нохта).

Двумоментный способ для окраски эозинофилов:

а) 4 капли (0,25 см3) эозина + дистиллированной воды до З см3 смешать и красить 5 минут; слить и налить

б) 6 капель (0,4 см3) раствора синьки-азура 1: 1 000 + дистиллированной воды до 3 см3; смешать и красить 5 минут, смыть водой.

Окраска по Райту. Употребляется для окраски мазков крови. Способ приготовления: 1% раствор основной (медицинской) метиленовой синьки на 0,5% водном растворе двууглекислого натрия наливается в сосуд таким; образом, чтобы высота слоя жидкости не превышала 6 см, и нагревается в аппарате Коха при 100° в течение 1 часа (с момента образований пара). Затем жидкость охлаждается и фильтруется. Охлажденный фильтр в тонком слое при искусственном освещении должен иметь пурпурно-красный оттенок. К 100 см3 фильтрата прибавляется 500 см3 0,1% водного раствора эозина (желтоватого, растворимого в воде). При смешивании обеих жидкостей тотчас образуется обильный осадок; последний отфильтровывается и высушивается. Полученная таким образом краска растворяется в ступке в метиловом спирте в соотношении 0,1: 60,0. В продаже имеется готовая сухая краска фирмы Кольмэн и Белл (Coleman, Bell). Способ окраски: на сухой нефиксированный мазок наливается несколько капель краски, спустя 1 минуту прибавляется столько же капель дистиллированной воды; через 2 — 3 минуты препарат промываемся в воде (около полуминуты), пока он в тонком слое не приобретет розоватого оттенка. Результат окраски: благодаря наличию азура получается вишнево-красная окраска ядер и выявляется азурофильная зернистость как в лейкоцитах, так и в лимфоцитах; особенно четко выступает способом Райта зернистость в моноцитах. Несколько уступая окраске по Гимза и по Нохту в отношении окраски азуром, окраска Райта имеет все преимущества способа Май-Грюнвальда и Дженнера (Jenner) в отношении четкости окраски зернистости нейтрофилов, эозинофилов и особенно базофилов.

Окраска по Май-Грюнвальду. Окраска эозиново-кислой метиленовой синькой (Дженнер и Май-Грюнвальд). Эта окраска не содержит азура. Препарат не должен быть, предварительно фиксирован, так как смесь эозиново-кислой метиленовой синьки растворена в метиловом спирте, который одновременно и фиксирует. Готовую краску можно получить от Грюблера, но она имеется и в порошке, также и в таблетках, которые растворяются в чистом, свободном от ацетона метиловом спирте (1 таблетка на 10 см3 метилового спирта).

Окраска. 1. Препарат покрывается определенным количеством краски (предметное стекло — 2 см3, покровное — 0,5 см3), происходит фиксация препарата в продолжение 2 — 3 минут.

2. Прибавляется столько же дистиллированной воды, сколько прежде было налито краски, — происходит окрашивание препарата в продолжение 5 — 10 — 15 минут. Краска должна быть предварительно хорошо смешана с водой; это делается путем всасывания и выдувания жидкости пипеткой..

3. Препарат промывается в дистиллированной или простой воде, пока не станет розоватым.

4. Высушивание фильтровальной бумагой.

Эритроциты окрашиваются в красивый розовый цвет, хорошо выделяются более или менее резкая полихромазия и базофильная зернистость. Очень хороша зернистость базофильных и эозинофильных лейкоцитов, а также нейтрофильная зернистость; ядра же окрашиваются плохо в бледно-голубой цвет.

Окраска по Паппенгейму (Май-Гимза). Для того чтобы соединить преимущества окраски азурными смесями и окраски по Май-Грюнвальду, Паппенгейм предложил докрашивать препарат, окрашенный по Май-Грюнвальду, краской Гимза. В комбинированном способе при окраске по Май-Грюнвальду, после того как прибавляется к краске равное количество воды, рекомендуется красить только 1 минуту, а затем слить, отсосать оставшуюся влагу, поставив препарат ребром на фильтровальную бумагу, после чего налить свежеприготовленный раствор Гимза — 15 капель на 10мм3 дистиллированной воды; красить 10 — 12 минут. Такие препараты очень красивы, отличаются яркостью эритроцитов. Несомненно в настоящее время этот способ является самым лучшим для изучения базофильной структуры ядра и специфической зернистости лейкоцитов. Однако для изучения некоторых особенностей протоплазмы как базофильной зернистости и полихромазии эритроцитов, а также изменений нейтрофилов эта краска является малопригодной, так как, например, базофильная зернистость эритроцитов выявляется не вся и при этом очень капризно {одна и та же кровь может дать совершенно разные количественные данные), а изменения протоплазмы нейтрофилов видны только в виде более или менее крупных включений — светло-голубые образования (более мелкие тельца Деле тоже ускользают от наблюдения) — или же в Биде вакуолей.

Краска триацид (triacid) Эрлиха содержит в растворе метилгрюн, у которого три основные группы насыщены двумя кислыми красками: orange G и кислым фуксином:

1) мазок крови (лучше на покровном стеклышке) давностью 1 — 2 суток фиксируется жаром на подогретой медной пластинке в том месте, где нанесенная на нее капля воды не закипает, а скатывается в виде шарика — феномен Лайденпоста (Leidenpost); время фиксации — 10—20 секунд; стеклышко кладется мазком вниз;

2) краска наливается пипеткой на препарат и держится 5 — 10 минут;

3) промывка водой, пока перестает отходить краска;

4) высушивание фильтровальной бумагой канадским бальзамом. Зернистость нейтрофилов четко окрашивается в красновато-фиолетовый цвет, зерна эозинофилов ярко медно-красного цвета. В остальных кровяных тельцах зернистость не выявляется. Ядро окрашивается диффузно, бесструктурно в голубовато-зеленый цвет, местами с выпадением темно-зеленых зерен.

Окраска метиленовой синькой. Из монохроматических красок практическое применение давно имеет окраска метиленовой синькой.

Употребляются methylenblau medicinale purissimum Hochst, methylenblau rectificatum Эрлиха или methylenblau В. pat. 1,25 до 1% водные растворы, а также лефлеровская щелочная метиленовая синька и раствор boraxmethylenblau Мансона (Manson).

Приготовленными растворами препарат (предварительно фиксированный, лучше всего метиловым спиртом) окрашивается 5 — 20 секунд.

Значительно больше выявляется methylenblau medicinale purissimum {Грюблер) в более сильном разведении и при продолжительной окраске.

Предложенный способ заключается в следующем: 1% раствор methylenblau medicinale (Грюблер) в дистиллированной воде перед употреблением снова разводится — 5 капель на 20 см3 водопроводной воды; препарат (фиксированный метиловым спиртом) покрывается высоким слоем раствора краски и оставляется на 1 час, после этого смывается водой и высушивается. Ядра хорошо окрашиваются, очень ясно и полностью выявляется полихромазия и базофильная зернистость эритроцитов; протоплазма нормальных нейтрофилов слабо диффузно окрашена в голубоватый цвет, при различных интоксикациях в ней появляются комочки голубоватого цвета, то равномерно рассеянные по всей протоплазме, то группами; это — токсично реактивная зернистость нейтрофилов, тельца Деле также хорошо выступают.

Окраска карбол-фуксин-метиленовой синькой. Для выявления токсичности нейтрофилов мной предложена основная краска: карбол-фуксин-метиленовая синька.

Приготовляется два раствора:
1. 1,0 fuchsin fur Вас. Грюблера (основной) растворяется в 15 г 96° спирта при нагревании; после того как раствор, остынет, к нему прибавляется 100 см3 5% раствора карболовой кислоты (Ac. carbolici).

2.  1% водный раствор methylenblau medicinale purissimum Грюблера.

На фиксированный в продолжение 3 минут метиловым спиртом препарат наливается высоким слоем заготовленный ex tempore следующий состав: к 20 см3 водопроводной воды прибавляется 7 капель первого раствора, взбалтывается, а затем прибавляется 5 капель второго раствора и снова взбалтывается. Окраска в продолжение 1 часа, после чего препарат смывается водой и высушивается.

Мы теперь пользуемся скорым способом этой окраски, предложенной Саркисьян: на 10 см3 свежей холодной водопроводной воды берется 14 капель раствора метиленовой синьки и 4 капли раствора фуксина. Окраска в течение 6 минут. Хорошо затем докрасить в течение 2 минут следующим раствором: 5 капель метиленовой синьки на 20 см3 водопроводной воды.

Токсичные изменения в протоплазме нейтрофильных лейкоцитов и миэлоцитов значительно тоньше выражены, чем при окраске одной метиленовой синькой; имеются все переходы от синеватой сетки к крупной комковатости, тогда как в иных случаях вся протоплазма как бы усеяна мелкими, пылевидными зернышками. Центросома в виде красноватой точки или палочки в середине протоплазмы между сегментами ядер нейтрофилов и эозинофилов; при процессе сегментации ядра центросома лежит эксцентрично у сегментирующейся части, местами она двойная (по обе стороны сегмента); у лимфоцитов и мононуклеаров центросома не всегда выявляется; в удачном препарате она находится около ядра в светлом перинуклеарцом участке. Для удачной окраски необходимо, во- первых, чтобы посуда была чистая — без щелочи и кислоты (то же самое, как и при других окрасках), во-вторых, чтобы из капельницы всегда получалась одинаковой величины капля. Нужно следить, чтобы капли метиленовой синьки были бы одинаковы между собой, точно так же, как и капли карбол-фуксина между собой. Отметим, что капля метиленовой синьки всегда больше, чем капля карбол-фуксина. Окраска должна вестись аккуратно и быстро. Свежие препараты, окрашенные по Гимза, хорошо окрашиваются карбол-фуксин-метиленовой синькой (без предварительного раскрашивания), и наоборот.

Зернистость эозинофилов при фиксации чистым метиловым спиртом получается темно-красной, зерна немного овальной формы вследствие неравномерной окраски по окружности; зернистость базофилов синяя с лиловатым оттенком, частью растворяется. В ядрах выявляется оксихро-матиновая структура в виде розовых полосок.

Окраска метилгрюн-пиронином. Метилгрюн-пиронин (Паппенгейм-Унна) содержит две основные краски: пиронин красит главным образом базофильные вещества протоплазмы, а метилгрюн — ядерный хроматин. Протоплазма лимфоцитов, особенно же плазматических клеток, получается ярко-красной; поэтому она является излюбленной, но не специфической краской для плазматических клеток.

Окраска по Шриде-Альтмаиу. Модификация Фрейфельд. Окраска для выявления шриде-альтмановской .зернистости в лимфоцитах, митохондрий и оксихроматина. При предложенной мной модификации шриде-альтмановской окраски выявляется как фуксинофильная зернистость в лимфоцитах и мононуклеарах, так и фуксинофильная (митохондральная) зернистость в миэлобластах и в эритробластах; перинуклеарная фуксинофильная зернистость эритробластов сохраняется и в молодых эритроцитах, по структуре такого же строения, как и субстанция granulo-filamentosa (которая выявляется при витальной окраске в эритроцитах). Интенсивно окрашивается оксихроматин ядер, особенно резко и характерно в, эритробластах, так что их тотчас можно выделить из множества других молодых клеток, где оксихроматин окрашен слабее. В зрелых лейкоцитах оксихроматин тоже обнаруживает характерное расположение. Центросомы в виде темно-красного тельца (частью с двумя центриолами) лучше всего обнаруживается в нейтрофилах, хуже в миэлоцитах и изредка в эритробластах.

Способ окраски мазка крови, сделанного на покровном стеклышке:

1. Фиксация в 1% растворе осмиевой кислоты, без доступа воздуха и света 1/—1 час.

2. Быстро смыть дистиллированной водой.

3. Красить 20—25 минут раствором альтмановского кислого фуксина на анилиновой воде при легком нагревании над небольшим пламенем спиртовой лампочки (пары не должны образовываться); препарат проводится медленно на расстоянии 4 см от пламени, затем 1 — 2 минуты препарат охлаждается; нагревание и охлаждение препарата повторяются несколько раз. Приготовление краски: к 100 см3 насыщенного фильтрованного раствора анилина в дистиллированной воде прибавляется 20 г кислого фуксина и фильтруется.

4. Совершенно остывший препарат смывают каплями раствора пикриновой кислоты, пока стекающая жидкость станет желтой. Приготовление пикриновой кислоты: насыщенного раствора пикриновой кислоты 1 часть и 7 частей 20% спирта.

5. Быстро сполоснуть в абсолютном спирте.

6. Нейтральный ксилол.

7. Нейтральный канадский бальзам.

Витальная окраска (суправитальная, или премортальная) брилланткрезильблау. Наиболее удобной является окрабка брилланткрезильблау. Приготовляется насыщенный в абсолютном спирте раствор (приблизительно 1 г брилланткрезильблау на 80 см3 абсолютного спирта). На подогретое предметное стекло стеклянной палочкой наносится немного раствора краски и быстро размазывается другим предметным стеклом (наподобие мазка крови); на стекле получается едва заметный синевато-лиловатый налет. Приготовленные таким образом стекла могут употребляться продолжительное время. На покрытом краской стекле делается затем обычным способом мазок крови, который тотчас же (влажным) переносится на 3 — 5 минут во влажную камеру; последняя представляет собой обыкновенную чашку Петри или чашку Дригальского, в которой по краю (по окружности) уложен валик из фильтровальной бумаги (на дне камеры воды не должно быть). В камере брилланткрезильблау окрашивает substantia granulo-filamentosa эритроцитов; затем препарат вынимается и оставляется на воздухе высохнуть, после чего рассматривается под иммерсией. Средней нормой является 1—80/00 ретикулоцитов, 1 — 2 ретикулоцита в каждом поле зрения и через 3 — 5 полей зрения иммерсии (считая 200 эритроцитов в каждом поле зрения). Шиллинг комбинировал окраску Гимза брилланткрезильблау с таким расчетом, что окрашенный брилланткрезильблау мазок фиксируется 3 минуты метиловым спиртом, а затем красится обычной смесью Гимза. Препараты действительно получаются очень красивыми (при окраске по Май-Грюнвальду яркорозовый цвет эритроцита еще лучше оттеняет синюю зернистость); однако часть substantia granulo-filamentosa, несомненно, пропадает, поэтому для подсчета такие препараты не годятся. Зернисто-нитчатую субстанцию в эритроцитах можно получить и с водными растворами различных красок; тогда приходится к капле крови (на предметном стекле) прибавлять каплю раствора краски и, покрыв покровным стеклышком, рассматривать в толстом слое. При таких условиях сделать правильный количественный учет невозможно, так как всякий раз получается различной толщины слой. Такими красками являются нейтральрот, метиленблау, метиленазур, янусгрюн, метилвиолет.

Забрацес (Sabrazes) для выявления substantia granulo-filamentosa польуется методом, удобным тем, что он пригоден для сухих мазков. Способ приготовления: мазок крови, сделанный на покровном стекле (любой давности), кладут на небольшую, каплю methylenblau medicinale purissimum (раствор в дестиллированной воде 1: 500), нанесенную на предметное стекло.

Окраска телец Гайнца метилвиолетом. Большое диагностическое значение имеет определение телец Гайнца при отравлениях; они получаются при действии кровяных ядов, ведущих к образованию метгемоглобина. Резче всего тельца Гайнца получаются при витальной окраске метилвиолетом (1,0 метилвиолета растворяют в 100 см3 0,6% водного раствора поваренной соли). К капле крови на предметном стекле прибавляют каплю указанного раствора и покрывают покровным стеклом.

Значительно удобнее кровь смешать с раствором метилвиолета в центрифужной пробирке, а затем из осадка делать обычный мазок. При указанных отравлениях (анилин, бертолетова соль, пирогалловая кислота и др.) в эритроцитах выявляется одно, реже несколько темно-фиолетового цвета зерен, которые местами плавают свободно в жидкости. Препарат можно некоторое время сохранять во влажной камере. Иногда количество телец Гайнца при стоянии несколько увеличивается. В слабо выраженных случаях брилланткрезильблау может иногда не выявить телец там, где метилвиолет выявляет их очень хорошо. Для того чтобы удлинить время окрашивания с брилланткрезильблау, можно на предметное стекло опустить каплю крови и покрыть ее покровным стеклом.

Окраска на жир Суданом по Цезарис-Демелю. Предметное стекло покрывают следующим раствором: брилланткрезильблау 0,02, Судана III 0,04 и абсолютного алкоголя 15,0; после высыхания на стекле образуется пылевидный осадок. На покровное стеклышко наносится капля крови и кладется на стекло с краской. Жировые капли в лейкоцитах окрашиваются в оранжево-красный цвет. Жировые капли обнаруживаются главным образом при инфекционных заболеваниях.

Окраска Суданом по Ионеску (Ionesku). Приготовляется два раствора. Первый раствор: насыщенный в абсолютном спирте раствор Судана III; второй раствор: насыщенный в абсолютном спирте раствор азура II. Перед употреблением оба раствора смешивают в равных частях и наносят толстым слоем на хорошо обезжиренное предметное стекло. После того как краска высохнет, предметное стекло хорошо протирают марлей или ватой, так что смесь краски остается лишь в тонком слое. Затем на обработанное таким образом предметное стекло накладывают покровное стекло с небольшой каплей крови. Стеклышко слегка придавливают и обмазывают по краям вазелином или парафином. Через 1/2 — 1 час препарат исследуется под иммерсией.

Окраска нильблау сульфатом главным образом для телец Гайнца и «эритроконтов» Шиллинга. Предметное стекло смазывается 0,5 % спиртовым раствором нильблаусульфата; окраска в продолжение 5 минут во влажной камере. При пернициозной анемии и различных гемолитических анемиях в эритроцитах изредка обнаруживаются палочки, которые Шиллинг называет эритроконтами. Этой окраской также хорошо окрашиваются в эритроцитах substantia granulo-filamentosa и тельца Гайнца.

Прижизненная окраска нейтральрот-янусгрюном по Сабин. Симпсон (Simpson) ввел в 1921 г. в гистологическую технику витальную окраску нейтральрот-янусгрюном. Сабин приспособила этот метод и для изучения крови. Для этой окраски заготовляется два раствора:

1) нейтральрот 0,1 на 10 см3 абсолютного спирта,

2) янусгрюн в таком же спиртовом растворе.

В день исследования (или накануне) к 5 см3 абсолютного спирта прибавляется 20 капель первого раствора и 15 капель второго, взбалтываются и наносятся на предметное стекло, тщательно вымытое так, чтобы краска свободно стекала со стекла, поставленного вертикально на фильтровальную бумагу. После того как стекло, покрытое краской, совершенно высохнет, на него наносится капля исследуемой крови, покрывается покровным стеклышком и кладется на полчаса во влажную камеру.

Окраска считается законченной после того, как в протоплазме лимфоцитов и мононуклеаров выявлена митохондральная зернистость (окрашенная в зеленый цвет янусгрюном), а также оранжевого цвета гранулы нейтральрота, имеющиеся также в нейтрофилах. Ядра лейкоцитов остаются совершенно бесцветными: Сабин считает характерным для нормальных мононуклеаров розетко-образное расположение гранул нейтральрота соответственно центросфере. По нашим наблюдениям, нейтральрот-гранулы в мононуклеарах располагаются в виде розетки, но не всегда. Такое же расположение нейтральрот-гранул мы наблюдаем и в миэлобластах. В эритробластах также обнаруживаются янусгрюн-митохондрии и нейтральрот-гранулы. Как янусгрюн-митохондрии, так и нейтральрот-гранулы после исчезновения ядра в эритробластах остаются некоторое время в молодых эритроцитах. Практически мы пользуемся обнаружением этих молодых форм эритроцитов для установления характера регенерации. В норме они обнаруживаются в незначительном количестве: 1 — 2 — 5 в препарате; при усиленной регенерации число их увеличивается до многих в каждом поле зрения. При отмирании эритроцитов исчезают как митохондрии, так и нейтральрот-гранулы, а на их месте через некоторое время выступает вышеописанная зернисто-нитчатая субстанция; поэтому мы считаем эту окраску в отличие от других премортальных или поствитальных прижизненной.

Оксидазная реакция Винклер-Шульце (WinMer-Schultze). Реакция основана на получении индофенолблау при оксидации. С мазками крови реакция производится следующим образом:
1. Фиксирующая жидкость: 1 часть 40% формальдегида + 9 частей 95° спирта фиксировать в продолжение нескольких секунд или  же 40 % формальдегида + абсолютного алкоголя поровну в продолжение 15—20 минут.

2. Окраска:

а) 3 минуты слегка разведенным 1% водным щелочным раствором а-нафтола. Раствор приготовляется следующим образом: а-нафтол при нагревании в дистиллированной воде поднимается кверху и плавает в жидком виде; в этот момент прибавляется кристалл едкой щелочи, тогда а-нафтол растворяется в воде,

б) Не смывая и не осушивая препарата, его покрывают 1% водным раствором диметил-парафенилендиамина. Через несколько минут зернистость лейкоцитов становится темно-синей. Докрашивается препарат сильно разведенным раствором фуксина Циля.

а-нафтоловая реакция получается и с более старыми препаратами. Окраска очень скоро выцветает.

Пероксидазная реакция. Пероксидазную реакцию предложил Крайбиш (Kreibisch); очень хорошо она получается по методу Грэма (Graham). Фиксация жидкостью из 1 части 40% формалина + 9 частей 95° спирта; затем слегка промыть водой и покрыть раствором бензидина. Последний приготовляется следующим образом: к 10 см3 40° спирта прибавляется несколько кристаллов бензидина и 0,02 см3 3% перекиси водорода (пипетка от гемометра Сали); красить 5 минут, смыть. Обычно положительная реакция выявляется в виде золотисто-коричневых зерен, реже синеватых (первая стадия действия бензидина). Докрашивать можно тионином, синькой или по Гимза. Красятся только свежие препараты, которые долго сохраняются.

Результаты исследования в общем при оксидазной и пероксидазной реакциях одинаковы; иногда оксидазная реакция все же является более чувствительной. Нейтрофилы и эозинофилы дают положительную реакцию, базофилы — только молодые их формы (миэлоциты) — дают положительную реакцию; зрелые формы оксидазной реакции не дают. Негели, однако, говорит о резко положительной реакции базофилов. Мононуклеары дают слабо положительную, некоторые из них — отрицательную реакцию. При инфекционных заболеваниях в некоторых нейтрофилах исчезает оксидазная и пероксидазная реакция.

Имеются различные модификации пероксидазной реакции, например, а-нафтол-пероксидазная реакция Лёле (Loele). Предложенная Эпштейном методика дает хорошие результаты.

Способ Эпштейна:

1. Фиксировать мазок крови (не старше 48 часов) смесью Alkohol (95°} 90,0, Formol (40°) 10,0.
2. Промывать дистиллированной водой 15 — 20 секунд.
3. Налить на 3 минуты раствор из Alcohol (40°) — 100,0, а-нафтола —1,0, 3% Н2О—  0,2 (по Грэму).
4. Промыть дистиллированной водой.
5. Красить в продолжение 15 минут (до 14 часов) в следующем растворе:

Приготовление азур-эозина и окраска препаратов
6. Быстро промыть дистиллированной водой (1 секунда).
7. Промыть в 1% растворе таннина (1 секунда).
8. Просушить фильтровальной бумагой.

Дающая пероксидазную реакцию зернистость нейтрофилов, эозинофилов и мононуклеаров окрашивается в ярко-зеленый цвет. Эритроциты зеленоватые, в остальном характерная окраска азурсодержащей смеси.

Окраска на липоиды Суданом. Зерт (Sehrt) предложил специальную окраску на липоиды Суданом мазков крови; с помощью этой окраски выяснилось, что зернистость как нейтрофильных, так и эозинофильных лейкоцитов, а также мононуклеаров суданофильна, т. е. что она дает характерную липоидную окраску.

Модификация этой окраски Гольдманом дает очень хорошие результаты; с помощью этой окраски установлено, что зернистость лейкоцитов, окрашивающаяся Суданом, всегда дает оксидазную реакцию.
Способ окраски:
1.    Фиксация свежего мазка крови в продолжение 3 минут раствором 1 части Formol (40°) и 4 частей Spiritus rectificati.
2.    Промыть дистиллированной водой.
3.    Смыть слабым спиртовым раствором (30 — 40°).
4.    Красить в течение 15 минут следующим раствором:
Приготовление азур-эозина и окраска препаратов
Спиртовые растворы Судана и а-нафтола кипятятся в продолжение 5 минут. К остывшему раствору прибавляется перекись водорода.
5.    Промыть дистиллированной водой.

Затем автор окрашивает ядра 1 — 3 минуты гематоксилином Бёмера (Bohmer): 5 капель + 2 — 3 капли Liq. ferri sesquichlorati (по Вайнгерту: Liq. ferri sesquichlorati 4,0 — 5,0, Aq. hydrochlorici 1,0, Aq. destill. ad 100,0). Лучшую окраску ядер дает гематоксилин Карацци (Karazzi): 0,25 г кристаллического гематоксилина, 0,025 г йодноватого калия (KJО3), 1,0 калийных квасцов, 25,0 глицерина, дистиллированной воды 100,0.

Результаты окраски: зернистость нейтрофилов, эозинофилов и мононуклеаров ярко оранжево-красного цвета.


Практические занятия медицинские биологические препараты для профилактики и лечения инфекционных заболеваний

Занятие 1-е. Вакцины и анатоксины.

Вопросы для обсуждения. 1. Искусственный иммунитет, активный и пассивный. 2. Препараты для создания искусственного активного иммунитета: вакцины и анатоксины. 3. Виды вакцин: живые, убитые и химические. 4. Способы приготовления вакцин. 5. Анатоксины нативные и очищенные, их получение и титрован...


Практические занятия вирусы

Занятие 1-е. Методы вирусологических исследований.

Вопросы для обсуждения: 1. Особенности биологии вирусов. 2. Принципы классификации вирусов. 3. Вирион, его строение, размеры и химический состав. 4. Микроскопические методы изучения морфологии вирусов. 5. Методы культивирования вирусов на культурах клеток, куриных эмбрионах, лаб...


Препараты для профилактики и лечения вирусных заболеваний

Препараты для профилактики и лечения оспы. Оспенная вакцина сухая — Vaccinum variolae siccum является живой вакциной. В зависимости от субстрата, на котором культивируют вирус, различают дермальную (культивирование на коже животных), тканевую (культивирование в клеточных культурах) и яичную или ововакцину (культивирование на куриных эмбрионах).

Возбудители основных вирусных заболеваний

Возбудитель оспы. Возбудитель оспы является одним из самых крупных вирусов (200—350 нм). Этот вирус может быть обнаружен в оптическом микроскопе при применении специальных методов окраски (тельца Пашена).

При натуральной оспе в эпителиальных клетках обнаруживаются внутриклеточные включения — тельца Гуарниери.



Категория: Техника исследования крови и кроветворных органов
Просмотров: 23 | Теги: окраска препаратов по Эрлиху, Приготовление азур-эозина