Методы приготовления и окраски препаратов для микроскопии

Изучение микроорганизмов в окрашенных препаратах дает возможность отчетливо рассмотреть форму клетки, а иногда и детали ее структуры. Окрашивание микробов является сложным физико-химическим процессом, зависящим от ряда условий — химической природы и pH составных частей клетки, свойств красителя и пр.

Приготовление микроскопических препаратов, а также посевы бактериальных культур производят при помощи бактериальных петель, изготовленных из платиновой или нихромовой проволоки.

Перед взятием культуры петлю стерилизуют прокаливанием на пламени горелкиПеред взятием культуры петлю стерилизуют прокаливанием на пламени горелки, а после приготовления препарата остатки культуры на петле уничтожают прожиганием. Препараты для микроскопии приготовляют на обезжиренных предметных стеклах.

На стекло помещают петлей небольшую каплю водопроводной воды, в которой тщательно растирают взятую петлей культуру или другой исследуемый материал.

При приготовлении препарата из бульонной культуры на предметное стекло при помощи пастеровской пипетки наносят небольшую каплю культуры. Использованная пастеровская пипетка для обеспложивания должна быть опущена в сосуд с дезинфицирующим раствором (3—5% раствор фенола).

В некоторых случаях необходимо получить тонкий и равномерный по толщине препарат. Тогда следует использовать методику приготовления мазка крови. К капле жидкости, нанесенной ближе к концу стекла, под углом в 45° подводят край шлифованного стекла, капля растекается по его краю, после чего быстрым движением шлифованного стекла приготовляют мазок.

После высушивания препарата на воздухе его фиксируют на пламени горелки, для чего медленно троекратно проводят препарат через пламя мазком кверху. Этим достигается фиксация мазка к поверхности стекла и гибель микробов. Фиксация на пламени не пригодна при изучении тонких клеточных структур (простейшие и др.).

В этих случаях следует пользоваться жидкими фиксаторами, например фиксатором Никифорова, который состоит из равных частей эфира и этилового спирта. Высушенные препараты помещают в жидкий фиксатор на 10—15 мин и затем вновь высушивают. Фиксированные мазки подвергают окрашиванию.

В зависимости от характера объекта и цели исследования выбирают тот или иной метод приготовления препарата для микроскопии.

При микроскопии живых микроорганизмов пользуются методами «висячей» или «раздавленной» капли. При приготовлении «висячей» капли взятую петлей или пастеровской пипеткой каплю суточной бульонной культуры наносят в центр покровного стекла, после чего накладывают его каплей вниз на стекло с лункой, края которой предварительно слегка смазывают вазелином. Капля не должна касаться краев лунки. При приготовлении «раздавленной» капли на предметное стекло наносят небольшую каплю культуры, которую покрывают покровным стеклом.

Микроскопирование живых препаратов («висячая» или «раздавленная» капли) производят с сильной сухой (Х40) или иммерсионной системой при несколько затемненном поле зрения (немного прикрыть диафрагму и опустить конденсор). Для изучения подвижности микробов можно пользоваться фазово-контрастной микроскопией или темным полем.

Для изучения морфологии грибов (аспергиллы, пенициллы, мукор) культуры выращивают на чашках Петри с мясопептонным агаром. Сначала культуры рассматривают под малым увеличением (Х8), для чего открытую чашку помещают на столик микроскопа. Из этих же культур приготовляют препараты для микроскопического изучения: на предметное стекло наносят каплю 10— 20% раствора щелочи (КОН или NaОН), в которой расщепляют кусочек мицелия гриба, взятого при помощи двух препаровальных игл. Препарат покрывают покровным стеклом и микроскопируют с сильной сухой системой (Х40) в слегка затемненном поле зрения. При взятии материала с мясопептонного агара следует помнить, что мицелий грибов плотно врастает в подлежащую среду, и поэтому необходимо брать культуру с небольшим кусочком среды.

Методы окраски микроскопических препаратов делят на простые и сложные.


Практические занятия медицинские биологические препараты для профилактики и лечения инфекционных заболеваний

Занятие 1-е. Вакцины и анатоксины.

Вопросы для обсуждения. 1. Искусственный иммунитет, активный и пассивный. 2. Препараты для создания искусственного активного иммунитета: вакцины и анатоксины. 3. Виды вакцин: живые, убитые и химические. 4. Способы приготовления вакцин. 5. Анатоксины нативные и очищенные, их получение и титрован...


Практические занятия вирусы

Занятие 1-е. Методы вирусологических исследований.

Вопросы для обсуждения: 1. Особенности биологии вирусов. 2. Принципы классификации вирусов. 3. Вирион, его строение, размеры и химический состав. 4. Микроскопические методы изучения морфологии вирусов. 5. Методы культивирования вирусов на культурах клеток, куриных эмбрионах, лаб...


Препараты для профилактики и лечения вирусных заболеваний

Препараты для профилактики и лечения оспы. Оспенная вакцина сухая — Vaccinum variolae siccum является живой вакциной. В зависимости от субстрата, на котором культивируют вирус, различают дермальную (культивирование на коже животных), тканевую (культивирование в клеточных культурах) и яичную или ововакцину (культивирование на куриных эмбрионах).

Возбудители основных вирусных заболеваний

Возбудитель оспы. Возбудитель оспы является одним из самых крупных вирусов (200—350 нм). Этот вирус может быть обнаружен в оптическом микроскопе при применении специальных методов окраски (тельца Пашена).

При натуральной оспе в эпителиальных клетках обнаруживаются внутриклеточные включения — тельца Гуарниери.



Категория: Лабораторные занятия по микробиологии
Просмотров: 47 | Теги: лабораторные по микробиологии, окраска препарата микроскопия, микробиология, Изучение микроорганизмов | Рейтинг: 0.0/0