Методы микроскопического исследования

В связи с очень малыми размерами микроорганизмов изучение их морфологии возможно только при помощи микроскопа. Если величина изучаемого объекта больше 0,2 мкм (разрешающая способность светового микроскопа), пользуются сильными (иммерсионными) системами, но если она меньше 0,2 мкм (200 нм), то изучение морфологии микроба возможно только с помощью электронного микроскопа, дающего увеличение в 100000 раз и более.

Световой микроскоп. С основными принципами устройства и работы с микроскопом студенты должны быть знакомы,

Методы микроскопического исследованияНа практических занятиях необходимо освоить микроскопию микробиологических объектов с иммерсионной системой. Фронтальную линзу иммерсионного объектива погружают в каплю масла во избежание потери света при переходе лучей из одной среды (стекло) в другую (воздух). Масло (лучше кедровое, а за неимением его касторовое или вазелиновое) имеет показатель преломления (1,51), близкий к показателю преломления стекла (1,52).

При микроскопироваиии окрашенных объектов необходимо создавать хорошее освещение, что достигается правильным использованием зеркала, конденсора и диафрагмы.

При микроскопироваиии с искусственным светом (лучше пользоваться специальным осветителем) применяют плоское или вогнутое зеркало, полностью открывают диафрагму и поднимают конденсор. При микроскопии неокрашенных объектов следует ограничить освещенность препарата, для чего несколько сужают диафрагму и опускают конденсор.

При работе с иммерсионной системой во избежание порчи объектива необходимо соблюдать следующие правила: после нанесения на поверхность препарата небольшой капли иммерсионного масла под контролем глаза сбоку погрузить в нее фронтальную линзу, а затем, глядя в окуляр, при помощи сначала микрометрического, а затем микрометрического винта установить препарат в фокусе микроскопа. Микроскопирование необходимо проводить, не снимая руки с микрометрического винта, что дает возможность, изменяя фокусное расстояние, рассмотреть всю поверхность поля зрения. После работы иммерсионная система и столик микроскопа должны быть очищены от масла. Масло с поверхности линзы лучше снимать мякотью кончика пальца, а затем осторожно протирать ее мягкой тканью.

Микроскопия в темном поле. Микроскопия в темном поле несколько расширяет разрешающую способность микроскопа. Ее применяют для изучения неокрашенных микробов, их подвижности. Этот метод микроскопии требует специального конденсора с затемненной центральной частью, которая, задерживая центральную часть пучка лучей, пропускает лишь боковые косо направленные лучи.

В связи с этим поле зрения остается неосвещенным, в то время как объекты, находящиеся в препарате, ярко светятся на темном фоне. При микроскопии в темном поле необходимо между верхней линзой конденсора и нижней поверхностью предметного стекла помещать каплю иммерсионного масла.

Люминесцентная микроскопия. Люминесценция — это свечение объекта, возбуждаемое поглощенной световой энергией (коротковолновая и ультрафиолетовая часть спектра). Микробы обладают слабой собственной первичной люминесценцией, и поэтому на практике пользуются наведенной люминесценцией путем обработки объекта растворами люминесцирующих красителей — флюорохромами (акридин, трипофлавин и др.), которые светятся под влиянием ультрафиолетовых и коротковолновых синих лучей. Отдельные флюорохромы обладают избирательностью, т. е. связываются с отдельными клеточными структурами — ядро, цитоплазма, включения и проч. Для люминесцентной микроскопии необходим источник ультрафиолетового света и набор светофильтров.

Фазово-контрастная микроскопия. Изучение живых неокрашенных микробов затруднено в связи с их малой контрастностью. В видимом свете они прозрачны.

Однако при прохождении света через микробную клетку происходит изменение фазы световых лучей, что обусловлено различиями толщины и показателей преломления отдельных структур. Эти изменения могут быть обнаружены при использовании специальных фазово- контрастных устройств, в результате чего микроорганизмы и отдельные части микробной клетки становятся контрастными и видимыми человеческим глазом. Фазовоконтрастная микроскопия требует максимальной освещенности препарата.

Электронный микроскоп. В электронном микроскопе вместо световых лучей используется поток электронов, излучаемых специальным источником (электронная пушка). На пути потока электронов помещены электромагнитные линзы, которые для электронных лучей являются фокусирующими, т. е. действуют подобно линзам для световых лучей. Исследуемый препарат, приготовленный на тончайшей пленке, помещают в безвоздушной среде на пути потока электронов, после их прохождения через конденсорную линзу. Затем пучок электронов проходит через объективную и проекционные линзы.

Изображение микроскопируемого объекта наблюдают на флюоресцирующем экране. Возникновение изображения на экране обусловлено тем, что различные части исследуемого объекта обладают неодинаковой проницаемостью для электронов.

Электронная микроскопия дает возможность изучать объекты величиной 10—10 000 нм. Ее широко применяют для изучения тончайших структур бактериальной клетки и функциональных особенностей ее компонентов, для изучения морфологии и биологических свойств вирусов и фагов.


Практические занятия медицинские биологические препараты для профилактики и лечения инфекционных заболеваний

Занятие 1-е. Вакцины и анатоксины.

Вопросы для обсуждения. 1. Искусственный иммунитет, активный и пассивный. 2. Препараты для создания искусственного активного иммунитета: вакцины и анатоксины. 3. Виды вакцин: живые, убитые и химические. 4. Способы приготовления вакцин. 5. Анатоксины нативные и очищенные, их получение и титрован...


Практические занятия вирусы

Занятие 1-е. Методы вирусологических исследований.

Вопросы для обсуждения: 1. Особенности биологии вирусов. 2. Принципы классификации вирусов. 3. Вирион, его строение, размеры и химический состав. 4. Микроскопические методы изучения морфологии вирусов. 5. Методы культивирования вирусов на культурах клеток, куриных эмбрионах, лаб...


Препараты для профилактики и лечения вирусных заболеваний

Препараты для профилактики и лечения оспы. Оспенная вакцина сухая — Vaccinum variolae siccum является живой вакциной. В зависимости от субстрата, на котором культивируют вирус, различают дермальную (культивирование на коже животных), тканевую (культивирование в клеточных культурах) и яичную или ововакцину (культивирование на куриных эмбрионах).

Возбудители основных вирусных заболеваний

Возбудитель оспы. Возбудитель оспы является одним из самых крупных вирусов (200—350 нм). Этот вирус может быть обнаружен в оптическом микроскопе при применении специальных методов окраски (тельца Пашена).

При натуральной оспе в эпителиальных клетках обнаруживаются внутриклеточные включения — тельца Гуарниери.



Категория: Лабораторные занятия по микробиологии
Просмотров: 53 | Теги: микроскопия, микроскопическое исследование, Методы микроскопического исследован, лабораторные работы микробиология | Рейтинг: 0.0/0