Иммунными сыворотками пользуются для создания искусственного пассивного иммунитета. Эти препараты получают из крови гипериммунизированных животных (лошадей, коров и др.) или пользуются сывороткой крови иммунизированных людей.

Лошадей иммунизируют бактериальными токсинами и анатоксинами (антитоксические сыворотки), живыми или убитыми бактериями, вирусами или другими микробами (антимикробные сыворотки).

Иммунизацию животных проводят путем подкожных или внутривенных введений антигена в возрастающих дозах с определенными интервалами между инъекциями. Число инъекций зависит как от характера антигена, так и от индивидуальных особенностей животного-продуцента. По окончании курса иммунизации у животного стерильно берут кровь из яремной вены. После свертывания крови отсасывают сыворотку.

В настоящее время иммунные сыворотки выпускают только в очищенном и концентрированном виде. Для очистки и концентрации антитоксических сывороток применяют метод пептического переваривания, после чего производят осаждение активных фракций (антител) сульфатом аммония. Очищенную этим способом сыворотку подвергают диализу и стерилизующему фильтрованию (метод ДИАФЕРМ3 АМН СССР). При обработке сыворотки этим методом в 4—5 раз повышается содержание антитоксина в 1 мл препарата, уменьшается величина молекулы белка (антитела), в связи с чем значительно снижается процент и сила сывороточных осложнений. Помимо этого метода очистки, из антитоксических сывороток в настоящее время получают иммуноглобулины.

Антимикробные сыворотки (антибактериальные, антивирусные и др.) с целью очистки и концентрации подвергают фракционированию спиртоводными осадителями при температуре ниже 0°С. Этим способом из сыворотки извлекают гамма-глобулины. Кроме сывороток, изготовляемых из крови гипериммунизированных животных, для лечебных и профилактических целей используются сыворотки людей, перенесших то или иное заболевание (корь, коклюш и др.) или специально вакцинированных.

Противокоревой гамма-глобулин представляет собой препарат, получаемый из венозной крови взрослых доноров или плацентарной крови. Сыворотки взрослых содержат противокоревые антитела, так как все в детстве переносят корь. Человеческий гамма-глобулин в основном применяют для профилактики кори, а также для профилактики эпидемического гепатита и некоторых других заболеваний.

Из сыворотки крови человека после предварительной иммунизации получают гриппозный, коклюшный и некоторые другие гамма-глобулины.

Гамма-глобулины получают и из крови гипериммунизированных животных — антирабический, энцефалитный, лептоспирозный и др.

Готовые антитоксические и антимикробные сыворотки контролируют на стерильность путем посева на различные питательные среды и на безвредность введением их лабораторным животным.

Сила антитоксической сыворотки определяется по ее способности нейтрализовать определенное количество токсина. Для различных антитоксических сывороток разработаны методы их титрования in vivo и in vitro. Титр антитоксических сывороток выражают в количестве международных антитоксических единиц (ME), содержащихся в 1 мл сыворотки. Единица антитоксина — это условно взятая величина для каждого вида антитоксической сыворотки. Так, для противодифтерийной сыворотки антитоксической единицей считается то наименьшее количество иммунной сыворотки, которое нейтрализует 100 Dim дифтерийного токсина для морской свинки. 1 Dim дифтерийного токсина — это его наименьшее количество, которое вызывает гибель морской свинки массой 250 г при подкожном введении на 4-й день опыта.

По внешнему виду сыворотки должны быть прозрачными или слегка опалесцирующими, бледно-желтого цвета. Выпускают сыворотки в ампулах. На каждой ампуле, кроме приведенных выше данных, должно быть указано количество сыворотки в миллилитрах и количество международных единиц в ампуле. Условия хранения сывороток не отличаются от условий хранения других бактерийных препаратов.

Сыворотки применяют с профилактическими и лечебными целями. Сыворотки (иммуноглобулины, гамма-глобулины) вводят подкожно, внутримышечно и по особым показаниям внутривенно и в спинномозговой канал. Перед употреблением сыворотку подогревают в теплой воде до температуры 36—37°С и вводят под наблюдением врача в дозах, указанных в соответствующих наставлениях.

Введение человеку чужеродного белка (сыворотка животного) может вызывать побочные, нередко весьма тяжелые реакции. Поэтому необходимо вводить сыворотку по методу Безредки с проверкой индивидуальной чувствительности к вводимому чужеродному белку. Для этого сыворотку, разведенную в соотношении 1 : 100, в объеме 0,1 мл вводят внутрикожно в ладонную поверхность предплечья. У людей с повышенной чувствительностью в течение 20 мин после инъекции на месте введения сыворотки возникает папула, достигающая 1 см и более, окруженная зоной красноты. При отрицательной реакции через 20 мин вводят 0,1 мл неразведенного препарата, а затем через 30—60 мин — всю назначенную дозу. При введении сыворотки всегда должен быть наготове раствор адреналина в соотношении 1 : 1000, который вводят подкожно в случае возникновения шока.

На практических занятиях студенты производят определение титра антитоксической сыворотки методом флоккуляции. Для проведения этого исследования необходимо располагать препаратом дифтерийного анатоксина с определенным содержанием флоккулирующих единиц в 1 мл. В ряд пробирок наливают по 2 мл этого анатоксина и исследуемую противодифтерийную сыворотку в количествах 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 мл и т. д. Если сыворотки имеют высокий титр, их предварительно следует развести. Штативы с пробирками помещают в водяную баню при температуре 40°С. Зная содержание флоккулирующих единиц в использованном анатоксине, вычисляют содержание антитоксических единиц в 1 мл испытуемой сыворотки. Полученные результаты записывают в виде таблицы.

Титрование сыворотки методом флоккуляции является ориентировочным. Окончательно сыворотки титруют в опытах на животных.

На практических занятиях студенты должны просмотреть образцы различных иммунных сывороток, разобрать способы их приготовления, очистки и концентрации, титрования и применения.

Демонстрируются:

а) антитоксические сыворотки: противодифтерийная, противостолбнячная;

б) антимикробные — гамма-глобулины: противокоревой, противогриппозный и др.

Студентам следует ознакомиться с наставлениями к применению указанных сывороток.

Практические занятия медицинские биологические препараты для профилактики и лечения инфекционных заболеваний Занятие 1-е. Вакцины и анатоксины. Вопросы для обсуждения. 1. Искусственный иммунитет, активный и пассивный. 2. Препараты для создания искусственного активного иммунитета: вакцины и анатоксины. 3. Виды вакцин: живые, убитые и химические. 4. Способы приготовления вакцин. 5. Анатоксины нативные и очищенные, их получение и титрован... Читать далее...