Для жизнедеятельности бактерий необходима энергия. Энергия может освобождаться в результате различных химических превращений. Большинство микробов используют энергию, освобождающуюся при окислении различных веществ кислородом воздуха. Эти бактерии, которых называют аэробами, могут развиваться только в присутствии свободного кислорода. Анаэробные бактерии могут развиваться только в бескислородной среде, так как кислород оказывает на них губительное действие.

Анаэробные бактерии получают необходимую для их жизнедеятельности энергию, освобождающуюся при ферментативном расщеплении тех или иных органических соединений в отсутствие кислорода. Помимо аэробных и анаэробных бактерий, в природе широко распространены факультативные анаэробы, которые в зависимости от условий могут менять тип дыхания и развиваться как в присутствии, так и в отсутствие кислорода. Для определения типа дыхания у бактерий может быть использован очень простой способ — посев культуры уколом в высокий столбик агара. Аэробы (например, холерный вибрион, дифтерийная палочка) вырастают только в верхней части посева, факультативные анаэробы (кишечная палочка, тифопаратифозные бактерии)—по всей длине укола, анаэробы — только в самой глубине посева (столбнячная палочка, возбудители газовой гангрены).

Для создания условий анаэробиоза могут быть использованы физические, химические и биологические методы. Наиболее совершенным методом является метод эвакуации воздуха из герметически закрывающегося прибора (анаэростат, эксикатор), куда помещаются посевы анаэробных бактерий. При помощи масляного насоса из анаэростата удаляют воздух и заполняют его индифферентным газом (азот). Кислород может быть также связан химическим путем. В качестве химического поглотителя кислорода можно пользоваться щелочным пирогаллолом. Бескислородные условия можно создать и биологическим путем (метод Фортнера) при совместном культивировании аэробных и анаэробных бактерий в герметически закрытых чашках Петри.

Универсальной средой для культивирования анаэробов является среда Китта — Тароцци, состоящая из сахарного бульона и кусочков животных тканей. Животные ткани, особенно ткань печени, обладают способностью связывать кислород воздуха. Перед посевом кислород удаляют из среды путем ее прогревания на кипящей водяной бане в течение 10—30 мин с последующим быстрым охлаждением. После посева среды заливают слоем стерильного вазелинового масла. В качестве плотной питательной среды для культивирования анаэробов пользуются кровяным и сахарным агаром.

Для выделения чистых культур анаэробных бактерий, так же как и при выделении чистых культур аэробов, можно производить посев на чашки Петри, однако после посева их необходимо поместить в анаэростат. Но можно получить колонии анаэробов и более простым путем — в глубине столбика агара по методу Вейона — Веньяля.  При использовании этого метода исследуемый материал последовательно разводят в 5—7 пробирках с расплавленным и остуженным до 45°С сахарным агаром. Колонии анаэробов, вырастающие в глубине столбика агара,  имеют различную форму и величину. Для выделения чистой культуры колонию извлекают из глубины агара и переносят в пробирку со средой Китта — Тароцци.    

Для изучения методов культивирования анаэробов на занятии демонстрируют питательные среды для культивирования анаэробов (среда Китта — Тароцци, молоко, кровяной агар, сахарный агар в трубках Веньяля), культуры Cl.perfringens на среде Китта — Тароцци, молоке и отдельные колонии в глубине агара, полученные по методу Вейона — Веньяля. Студенты знакомятся с культивированием анаэробов в анаэростате, с созданием анаэробных условий химическим путем при помощи поглотителей кислорода и с биологическим методом Фортнера. Этот метод состоит в следующем: пластинку кровяного агара в чашке Петри делят на две части, вырезая по диаметру полоску агара. На одну половину густым газоном засевают культуру аэроба (например, чудесной палочки), на другую — материал, из которого выделяют анаэробных бактерий После посева чашки должны быть герметически закрыты, для чего их замазывают пластилином или заливают парафином.
 

Практические занятия медицинские биологические препараты для профилактики и лечения инфекционных заболеваний Занятие 1-е. Вакцины и анатоксины. Вопросы для обсуждения. 1. Искусственный иммунитет, активный и пассивный. 2. Препараты для создания искусственного активного иммунитета: вакцины и анатоксины. 3. Виды вакцин: живые, убитые и химические. 4. Способы приготовления вакцин. 5. Анатоксины нативные и очищенные, их получение и титрован... Читать далее...