Изменение морфологии, несомненно, основывается на химических и физико-химических изменениях составных частей ее субстрата. С этой точки зрения очень интересны те изменения в нейтрофилах при инфекционных заболеваниях, которые давно уже отмечались гематологами, окрашивавшими препараты азур-эозином, и при витальной окраске. Эти изменения сводятся к более резкой окрашиваемости нейтрофильной зернистости. Зерна становятся больше, различной формы; наряду с таким образом измененными нейтрофилами встречаются вакуолизированные, почти совершенно без зерен. Заслуга Негели заключалась в том, что он выдвинул практическое значение этих изменений, подробно останавливаясь на них в своей книге. В настоящее время вряд ли найдется более или менее опытный лабораторный работник, производящий исследования крови, который не был бы знаком с этими токсичными нейтрофилами. Вместе с тем клиника до сих пор не учла их значения: не только в клинических историях болезни при исследовании крови не отмечается, имеются ли токсичные нейтрофилы, но и в печатных работах только в самых редких случаях указывается наличность токсичных изменений в нейтрофилах, хотя лейкоцитарная формула приводится очень точно. Шиллинг, который при каждой — даже амбулаторной — истории болезни приводит толкование гемограммы, ни в одной из них не упоминает о патологических изменениях протоплазмы нейтрофилов. Правда, в последнем издании своей книги (1929) Шиллинг значительно больше останавливается на токсичных изменениях в лейкоцитах, однако он недооценивает их клиническое значение. Конечно, не игнорированием факта существования токсичных нейтрофилов объясняется это явление, а тем, что при окрашивании азур-эозином сила окрашиваемости нейтрофильной зернистости значительно вариирует от степени щелочности раствора краски, а также и реакции воды, и поэтому только в резко выраженных случаях можно уверенно говорить об изменении нейтрофильной зернистости.

При окраске карбол-фуксин-метиленовой синькой обнаруживается, что в норме протоплазма нейтрофилов очень слабо окрашивается фуксином; зернистость совершенно не окрашивается; между ядрами, обычно центрально, в протоплазме видна центросома в виде красной точки или палочки (рис. 1).

При некоторых острых инфекционных заболеваниях протоплазма нейтрофилов как бы пронизывается синеватой сеткой, которая затем распадается на отдельные глыбки и зерна. Таким образом, протоплазма нейтрофилов при подострой и хронической интоксикации становится как бы усеянной синеватой зернистостью (рис. 2).

Последняя может не иметь ничего общего со специфической нейтрофильной зернистостью, а представляет собой, нужно думать, измененный под влиянием токсина белок протоплазмы. При параллельном просмотре препаратов одного и того же случая с резко выраженной токсичностью зернистости по Гимза и с резкими токсичными изменениями протоплазмы при окраске карбол-фуксин-метиленовой синькой приходится допустить возможность адсорбции на специфической зернистости выпавших в протоплазме белковых ч частиц, а также и изменение самой зернистости. В таких случаях характер и расположение зерен при окраске по Гимза и при окраске карбол-фуксин-метиленовой синькой совпадают. Наряду с этими изменениями протоплазмы очень резко выступают тельца Деле (Dohle). Деле описал различной величины и формы образования в протоплазме нейтрофилов при скарлатине, считая их паразитарными включениями. Такие же «включения» были описаны затем при самых различных заболеваниях, причем паразитарная натура их была окончательно отвергнута. Как тельца Деле, так и сетчатость протоплазмы появляются в остром периоде заболевания (скарлатина, пневмония и др.) или в периоде обострения хронического процесса.

Относительно роли центросом в развитии клеточной патологии известно очень мало. Имеется, например, указание Ромганьи (Romhanyi) об изменении центриол под влиянием действия рентгеновых лучей на клетки раковой опухоли крыс. Мы не имели возможности подробно изучать этот вопрос, но простой просмотр препаратов, окрашенных карбол-фуксин-метиленовой синькой при различной патологии, особенно дающей токсичные изменения нейтрофилов, с несомненностью указывает на участие центросом в развитии патологического процесса.

Для изучения токсичных изменений в протоплазме нейтрофилов экспериментально лучшим объектом является кошка, у которой в зрелых нейтрофилах при окраске по Гимза слабо выявляется специфическая зернистость [хотя зернистость имеется и выявляется при окраске Суданом по способу Зерт (Sehrt)-Гольдмана]. Шиллинг и Матис (Mathis) считают, что токсичные изменения в нейтрофилах при окраске карбол-фуксин-метиленовой синькой не имеют ничего общего со специфической зернистостью нейтрофилов, тогда как Глоор (Gloor) связывает ее со специфической зернистостью. Барта (Barta) объясняет токсичные изменения отложением в лейкоцитах белковых веществ.

Молдавский и Штодмейстер также считают изменения, выявляющиеся в виде токсичности нейтрофилов, обусловленными торможением созревания клеток; при этом основа протоплазмы может сохранять базофилию, частью в виде телец Деле, а зернистость незрелых миэлоцитов не созревает и поэтому выявляется в нейтрофильных лейкоцитах в виде более крупной и базофильной зернистости. 

Мы подошли к вопросу о патогенезе токсической зернистости нейтрофилов, сопоставляя при помощи прижизненной пункции костного мозга морфологию гранулоцитов в костном мозгу и в периферической крови. Для изучения были взяты случаи с токсичностью нейтрофилов в крови ++++, т. е. когда все нейтрофилы имели патологическую зернистость (хирургический материал — остро развившиеся флегмоны в самом начале заболевания).

Полученные результаты:

1.В большинстве случаев была установлена идентичность изменений нейтрофилов периферической крови и нейтрофилов, а также миэлоцитов костного мозга.

2. В некоторых случаях, однако, несмотря на резко выраженную патологическую зернистость нейтрофилов крови, нейтрофилы и миэлоциты костного мозга обнаруживали обычную нормальную зернистость. Возможность наличия костного мозга с нормальной зернистостью нейтрофильных миэлоцитов и нейтрофилов в то время, когда все нейтрофилы циркулирующей крови выявляют патологическую зернистость, доказывает: 

а) что образование токсической зернистости не связано ни с процессами регенерации, ни с процессами созревания зернистости нейтрофилов в костном мозгу;

б) что нормальная зернистость нейтрофилов изменяется под влиянием непосредственного воздействия на нее токсических веществ плазмы крови;

в) что характерные морфологические свойства для токсической зернистости нейтрофилы приобретают или только в циркулирующей крови, или также в костном мозгу под влиянием патологической плазмы крови, омывающей костномозговую ткань.

При резкой токсичности протоплазма нейтрофилов просветляется — ее коллоиды как бы адсорбируются на зернистости.

Важно отметить, что эти протоплазматические изменения в нейтрофилах нам приходилось иногда наблюдать несколько раньше ясно выраженных симптомов клинического заболевания, и часто они сохраняются довольно продолжительное время после клинического выздоровления. Следя за этими больными после их выписки из больницы, нам в некоторых случаях пришлось наблюдать рецидивы, осложнения, в других случаях клинически никаких осложнений в после инфекционном периоде не наблюдалось. Ни в одном случае у здорового человека подобных изменений в нейтрофилах не было обнаружено, — наблюдения в течение многих лет на большом материале позволяют нам утверждать это с уверенностью.

Процесс в клетках костного мозга и в нейтрофилах циркулирующей крови нельзя назвать дегенеративным, так как клетки сами по себе никаких других признаков дегенерации не обнаруживают, а в костном мозгу обнаруживается гиперплазия ткани с большим количеством миэлоцитов и без очагов некроза или некробиоза. Поэтому изменения в нейтрофилах, нужно думать, реактивного характера: под влиянием действия токсина изменяется химизм клетки, но она продолжает жить, функционировать в изменившихся условиях. Иначе говоря, эти зернистые нейтрофилы остались активными (функционирующими), будучи токсически измененными. Для краткости мы их называем токсично-реактивными — в отличие от дегенерирующих клеток с пикнотическим ядром и с гомогенезированной вакуолизированной протоплазмой. При очень тяжелом течении болезни токсично-реактивные нейтрофилы подвергаются вторичной дегенерации; это можно наблюдать, например, при крупозной пневмонии перед кризисом. Интересно отметить, что токсичность нейтрофилов в резко выраженных инфекционных случаях встречается одновременно со сдвигом нейтрофилов влево по Шиллингу, тогда как нередко приходится наблюдать случаи с клинически еще слабо проявляющимися симптомами заболевания, без сдвига нейтрофилов, но с сильной их токсичности) (+ + +, т. е. когда все нейтрофилы токсичны) или же с тремя, двумя и одним крестом.    

Появление патологических изменений в нейтрофилах в одних случаях обнаруживается как в основе протоплазмы, так и в ее зернистости. В других случаях основа протоплазмы не дает каких-либо видимых изменений, нейтрофилу и по своей величине не дают отклонений от нормы, однако патологическая зернистость в них может быть резко выражена (рис. 3 и 4).

Таким образом, мы видим, что токсические изменения могут иметь место на различных стадиях развития лейкоцитов и оказывать свое действие на основу протоплазмы и на специфическую зернистость. Последняя изменяет при этом свою биохимическую структуру и укрупняется, нужно думать, за счет адсорбции образующихся при этом процессе веществ на поверхности зернистости. Зернистость нейтрофильных миэлоцитов претерпевает при соответственной интоксикации те же изменения, что и у зрелых нейтрофилов.    

Токсические изменения нейтрофилов обусловливаются несомненно токсическими веществами и не бактериального происхождения.

Проба Шлезингера (Schlesinger): после внутримышечной инъекции молока при септических или токсических инфекциях в крови появляются токсично-зернистые нейтрофилы в случаях, когда они до инъекции молока отсутствовали.

Применяя наш способ окраски при массовом исследовании промышленных рабочих, мы часто встречались с тем, что выявляется целый ряд случаев с токсичностью, при обычном гематологическом исследовании не дающих никаких отклонений от нормы. Точно так же при клинически законченных инфекционных заболеваниях мы часто имеем нормальную лейкоцитарную формулу без сдвигов, однако с сохраняющейся токсичностью нейтрофилов; как было указано выше, часть этих случаев дает рецидивы или выявляется осложнениями, другая же медленно приходит к норме. Мы еще коснемся этого вопроса при рассмотрении картины крови при различных заболеваниях.

В 1939 г. Альдер (Alder) описал конституционально обусловленную аномалию зернистости лейкоцитов — нейтрофильных и эозинофильных, которую он наблюдал у двух сестер, у которых все лейкоциты были соответственно изменены, и у одной женщины с изменением только части лейкоцитов. Зернистость нейтрофильных лейкоцитов в этих случаях была грубее нормальной зернистости, почти черного цвета, местами с красноватым оттенком, густо выполняла всю протоплазму, там, где протоплазма просвечивала, она была темно-серого цвета.. При окраске буферными растворами оказалось, что зернистость этих нейтрофилов окрашивается при pH = 4,0, тогда как зернистость нормальных нейтрофилов ниже pH = 5,4 не окрашивается. Ядра нейтрофилов с 2 — 4 сегментами окрашиваются слабо, содержат много оксихроматина. Размеры нейтрофилов несколько превышают норму (13 u). Эозинофилы также больше нормальных (15,7 u), ядра с 2 — 3 сегментами, светлые, богаты оксихроматином. Зернистость в этих эозинофилах состоит только из больших базофильных гранул, выполняющих протоплазму. В других эозинофилах, наряду с большими голубыми, имеются более мелкие зеленоватые гранулы. Базофильные лейкоциты не обнаружены. В пунктате костного мозга миэлоциты выявляют такую же аномалию зернbстости. Альдер объясняет происхождение аномалии зернистости нарушением в процессе созревания и проводит параллель с «токсичной» или «патологической» зернистостью нейтрофилов при различных интоксикациях.

Токсичная зернистость в эозинофильных лейкоцитах описана в 1934 г. Глазером (Glaser). Изучая качественные сдвиги в лейкоцитах, в связи с лечением больных горным климатом, Глазер нашел в мазках крови у двух женщин единичные эозинофилы с грубыми базофильными глыбками в протоплазме вместо обычных круглых эозинофильных зерен; ядра этих эозинофилов были пикнотичны. Одновременно с повышением количества гемоглобина и эритроцитов исчезли токсичные эозинофилы.

Интересна также так называемая йодофилия нейтрофилов. Эрлихом было установлено, что если сухой мазок крови подвергнуть действию паров йода, то нейтрофилы нормальной крови дадут слабое диффузное прокрашивание, тогда как в некоторых патологических случаях нейтрофилы интенсивно окрашиваются йодом. Эрлих предполагал, что йодофилия нейтрофилов обусловливается присутствием в них гликогена, другие видели в ней особую форму дегенерации лейкоцитов. Работы Эппингера проливают свет на сущность и значение этого феномена. Эппингер исходил из клинически известного наблюдения, что существует два вида гноя — в одних случаях имеется «pus bonum еt laudabile», с появлением которого наступает улучшение заболевания, и так называемый «холодный гной», свидетельствующий о недостаточной сопротивляемости организма по отношению к инфекции. При инъекции животным «горячего», токсичного гноя через 2 — 3 часа наступает сгущение крови, подобно тому как это наблюдается при отравлении гистамином. Животное слабеет, появляется понос и рвота, и в течение 3 — 4 часов может погибнуть при явлениях тяжелого токсического коллапса. Гистологически — картина серозного воспаления. Токсические свойства «горячего» гноя совершенно обезвреживаются прибавлением к нему настойки йода или бромовой воды; липоиды «горячего» гноя дают высокие цифры связываемого им йода (60 — 81), тогда как «холодный» гной дает низкие цифры. Гофбауер (Hofbauer) нашел в «горячем» гною большое количество йодофильных лейкоцитов, тогда как в «холодном» их совершенно не было обнаружено. Если человеку или животному впрыснуть внутримышечно скипидар, то получается абсцесс, богатый йодофильными лейкоцитами, а также большое количество йодофильных лейкоцитов в циркулирующей крови и в костном мозгу. Фошье (Fochier) высказывает предположение, что йодофилия лейкоцитов обусловлена накоплением в их липоидах витамина А и что высоким содержанием витамина А объясняются антиинфекционные свойства горячего гноя. Из болезней крови йодофильные лейкоциты встречаются при лейкемии и при пернициозной анемии, при вторичной анемии они отсутствуют (Гофбауер). Костный мозг вырабатывает йодофильные элементы только под влиянием определенного типа инфекции, при других он их не вырабатывает.

Йодная реакция лейкоцитов. Предметное стекло с мазком крови помещается в чашку Петри. На свободные от мазка края стекла помещается несколько кристаллов йода. Таким образом, мазок крови подвергается действию паров йода, реакция происходит в течение нескольких минут. Затем на препарат наносится капля сиропа левулезы и покрывается покровным стеклом. При положительной реакции нейтрофилы диффузно коричневого цвета или содержат интенсивно окрашенные глыбки. В норме нейтрофилы принимают слегка буроватый оттенок.

При так называемой витальной окраске, когда мазок кладется в камеру влажным, нейтрофилы нормальной крови дают довольно резкую окраску; поэтому для установления патологической йодофилии нейтрофилов можно пользоваться только сухим мазком.

Практические занятия медицинские биологические препараты для профилактики и лечения инфекционных заболеваний Занятие 1-е. Вакцины и анатоксины. Вопросы для обсуждения. 1. Искусственный иммунитет, активный и пассивный. 2. Препараты для создания искусственного активного иммунитета: вакцины и анатоксины. 3. Виды вакцин: живые, убитые и химические. 4. Способы приготовления вакцин. 5. Анатоксины нативные и очищенные, их получение и титрован... Читать далее...